?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。

DMEM 無(wú)糖培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的被廣泛使用的基礎(chǔ)  培養(yǎng)基 ，是在MEM培養(yǎng)基 的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時(shí)又分為高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)和無(wú)糖型（0mg/L)。

DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的縮寫(xiě)，所以其特點(diǎn)主要包括以下：

（1）氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍，且含有非必需氨基酸

（2）維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍；

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫(xiě)上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)試劑盒

humahyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit 人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-nucleolusaibody,ANA試劑盒人抗核仁抗體(ANA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物糖類總量鐵比色法定量試劑盒20次

humanUDP-glucoseceramideglucosylansferaseELISAKit人尿苷二0酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠肌肝（Cr）試劑盒         組裝/原裝

小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)試劑盒   96T/48T

小鼠活化素A(Activin-A)試劑盒   96T/48T

小鼠活化蛋白C(APC)試劑盒   96T/48T

磷酸化磷脂酰肌醇激酶調(diào)節(jié)亞單位gamma抗體

胰島素樣生長(zhǎng)因子I受體抗體

PVRL2重組人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

黏病毒耐藥蛋白1(MX1)重組蛋白 Recombinant Myxovirus Resistance 1 (MX1)

IFNA8重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 Protein

CRABP2 Protein Human 重組人 CRABP2 蛋白

HA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝屬

DMEM 無(wú)糖培養(yǎng)基CRP (C-reactive protin 0.5mgCRP (C-reactive protin) C-反應(yīng)蛋白(抗原)

DKKL1 Protein Human 重組人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SERPINE1重組大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

SERPINA7 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA7 / TBG 蛋白

IGFBP7重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 Protein