ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測(cè)試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
商品屬性：

測(cè)定意義：

ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶,其催化產(chǎn)生的乙酰輔酶  可用于脂肪酸合成和碳鏈延長(zhǎng)、黃酮類(lèi)物質(zhì)合成、氨基

測(cè)定原理:

ACL 在 ATP 和輔酶  存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶 、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋(píng)果酸脫氫酶進(jìn)一步

NADH 生成蘋(píng)果酸和 NAD+,在 340nm 測(cè)定 NADH 減少速率,計(jì)算 ACL活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:液體 2μL×1 支,4℃保存;

樣本的前處理:

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~10

議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。

10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定

(1)工作液的配置,將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 5min;(

劑一至試劑二和試劑三中,充分混勻溶解后轉(zhuǎn)移至試劑一瓶中,重復(fù) 2-3 遍);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融

(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,混勻,立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和光值 A2,計(jì)算 ΔA=A1-A2。

ACL 活性計(jì)算:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)ACL 活力計(jì)算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=1608×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 ACL 活力計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.216×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體

總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)ACL 活力計(jì)算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=3216×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 ACL 活力計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=3216×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=6.432×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本

樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 

生化試劑盒的使用注意事項(xiàng)：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)對(duì)象選擇合適的試劑盒，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

嚴(yán)格遵循說(shuō)明書(shū)：按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，避免誤用或浪費(fèi)。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存，避免陽(yáng)光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時(shí)間、pH值等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購(gòu)流程:

1、訂購(gòu)前,請(qǐng)與銷(xiāo)售員核對(duì)產(chǎn)品中文名稱(chēng)/CAS號(hào)/英文名稱(chēng)等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨。(庫(kù)存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請(qǐng)?jiān)诎l(fā)貨前與銷(xiāo)售員聯(lián)系。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶(hù)后顧之憂(yōu)。

5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過(guò)程中如有任何疑問(wèn),可提供技術(shù)指導(dǎo)。