NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒微量法

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商品屬性：

測(cè)定意義：

測(cè)定原理：

NADPase 能夠催化 NADP+水解為 NAD+和無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)測(cè)定 NADPase 活性。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15 mL×1 瓶， 4℃保存。

試劑二：粉劑×4 支，-20℃保存；用時(shí)加入 1 mL 試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。

試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。

試劑五：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑六：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑六 20 倍稀釋，即取 0.5mL 試劑六加 9.5 蒸餾水，充分混勻。

定磷試劑的配制：按 H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色，若無(wú)色則試劑失效，若污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

樣本的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。810min，取上清，置冰上待測(cè)。

訂購(gòu)流程:

1、訂購(gòu)前,請(qǐng)與銷售員核對(duì)產(chǎn)品中文名稱/CAS號(hào)/英文名稱等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨。(庫(kù)存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請(qǐng)?jiān)诎l(fā)貨前與銷售員聯(lián)系。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過(guò)程中如有任何疑問(wèn),可提供技術(shù)指導(dǎo)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 660nm，蒸餾水調(diào)零。

2、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）

37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確反應(yīng) 30min 后，95℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，10000g5min，取上清

3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）

注意事項(xiàng)：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格，要沒有一點(diǎn)磷，若試管放過(guò)磷酸或磷酸鹽緩沖液，干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來(lái)水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測(cè)成

2、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管和對(duì)照管只要做一次即可。

NADPase 酶活性計(jì)算：

1、按組織蛋白濃度計(jì)算：

定義：每小時(shí)每毫克組織蛋白 NADPase 分解 NADP 產(chǎn)生 1μmol 無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè) NADPase 活力單位。

NADPase (μmol/h/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(V 樣×Cpr)÷T=5×(A 測(cè)定管-A 對(duì)A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算：

定義：每小時(shí)每 g 組織 NADPase 分解 NADP 產(chǎn)生 1μmol 無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè) NADPase 活力單位。

NADPase (μmol/h /g 鮮重)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=5×(A

管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷WC 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V 總：酶促反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：加入樣本體積

V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5 小時(shí)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度mg/mL；W：樣本鮮重，g。

生化試劑盒的使用注意事項(xiàng)：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)對(duì)象選擇合適的試劑盒，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

嚴(yán)格遵循說(shuō)明書：按照試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操作，避免誤用或浪費(fèi)。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存，避免陽(yáng)光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時(shí)間、pH值等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：