PCR試劑盒說明書樣本采集、存放及運(yùn)輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；

3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

普通PCR反應(yīng)流程：

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100mg左右的植物種子（約1/4黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1mL溶液A中，95℃保溫10-15分鐘，加入0.1mL溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

自備物品：

15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器

比色皿：用于比色的容器

96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析

儲(chǔ)存條件：

14℃或-20℃

準(zhǔn)備物品

清理液（A）毫升

染色液（t B）微升

稀釋液（C）毫升

溶解液（tD）毫升

產(chǎn)品說明書1份

PCR試劑盒說明書反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)，這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：

引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

間甲酚英文名稱：M-cresolCAS號(hào)：108-39-4分子式：108.14分子量： C7H8O

異硫熒光素(FITC)英文名稱：Fluorescein isocyanate (FITC)CAS號(hào)：27072-45-3分子式：389.38分子量： C21H11NO5S

孕諾酮英文名稱：Pregnant womenCAS號(hào)：2137-18-0分子式：316.43分子量： C20H28O3

7-溴-5-氯-8-羥喹啉分子式：258.5分子量： C9H5BrClNO英文名稱：7- -5- chloride -8-CAS號(hào)：7640-33-7

2-硫脲嘧分子式：128.14分子量： C4H4N2OS英文名稱：2- thioureaCAS號(hào)：141-90-2

霉能靈分子式：411.74分子量： C17H13Cl3N4S英文名稱：Mei NenglingCAS號(hào)：86598-92-7

水溶性四氮唑分子式：分子量：英文名稱：水溶性四氮唑CAS號(hào)：

2-氯-3-吡分子式：138.55分子量： C6H3ClN2英文名稱：2- chloro -3- cyanopyridineCAS號(hào)：6602-54-6

十一英文名稱：Eleven acidCAS號(hào)：112-37-8分子式：186.29分子量： C11H22O2

2-氯-5-甲分子式：252.48分子量： C7H6ClI英文名稱：2- chloride -5-CAS號(hào)：116632-41-8

5-氯并三氮唑分子式：153.57分子量： C6H4ClN3英文名稱：5- three nCAS號(hào)：94-97-3

ERG25  甲基固醇羥化酶單加氧酶1抗體 0.2ml

Rabbit Anti-Monkey IgM  兔抗猴IgM 1mg

Persephin  PSP抗體 0.1ml

PACAP-27/38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體 0.1ml

phospho-HOMER3(Thr36)  磷酸化HOMER3蛋白抗體 0.1ml

HIPK2  Fas相互作用蛋白激酶2抗體 0.2ml

ADCY1  腺苷酸環(huán)化酶1抗體 0.2ml

Cathepsin S  組織蛋白酶S抗體 0.2ml

phospho-Cyclin E(Thr395)  磷酸化周期素E抗體 0.1ml

S100-A9/MRP14/CFAG/Calgranulin B  S100A9抗體 0.1ml