通用型PCR試劑盒使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100mg左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1mL溶液A中，95℃保溫10-15分鐘，加入0.1mL溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。

普通PCR反應(yīng)流程：

自備物品：

漢坦病毒通用型(HTV-U)核酸檢測試劑盒圖片15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器

比色皿：用于比色的容器

96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析

儲存條件：

14℃或-20℃

準(zhǔn)備物品

清理液（A）毫升

染色液（t B）微升

稀釋液（C）毫升

溶解液（tD）毫升

產(chǎn)品說明書1份

堿性橙21英文名稱：Basic orange 21CAS號：3056-93-7分子式：350.88分子量： C22H23ClN2

2,4-二甲分子式：122.17分子量： C7H10N2英文名稱：2,4- two amino tolueneCAS號：95-80-7

二硫二并噻唑分子式：332.49分子量： C14H8N2S4英文名稱：Two two benzothiazole sulfideCAS號：120-78-5

對二硝分子式：168.11分子量： C6H4N2O4英文名稱：Two nitrobenzeneCAS號：100-25-4

1-乙-2-甲咪唑分子式：135.17分子量： C7H9N3英文名稱：1乙- 2 -甲咪唑CAS號：23996-55-6

2,5-二氟分子式：347.9分子量： C6H3FI2英文名稱：2,5- two - iodineCAS號：147808-02-4

丁氟消草英文名稱：Butyl fluorideCAS號：55283-68-6分子式：333.26分子量： C13H14F3N3O4

鹽酸四咪唑分子式：240.75分子量： C11H13ClN2S英文名稱：Hydrochloric acid fourCAS號：5086-74-8

1,3-二氯-2-分子式：272.9分子量： C6H3Cl2I英文名稱：1,3- two -2- chlorine 4-iodoCAS號：19230-28-5

馬兜鈴內(nèi)酰胺英文名稱：AristololactamCAS號：13395-02-3分子式：293.27354分子量：C17H11NO4

漢坦病毒通用型(HTV-U)核酸檢測試劑盒圖片Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

ZNF431  鋅指蛋白431抗體 0.2ml

Phospho-INPPL1(Ser576)  肌醇聚磷酸鹽磷酸酶樣蛋白1抗體 0.1ml

Rabbit anti-horse IgG whole serum  兔抗馬IgG抗血清 1ml

MARCH3  膜相關(guān)環(huán)指蛋白3抗體 0.2ml

phospho-ITGB4(Tyr1494)  磷酸化整合素β4抗體 0.1ml

PPO  腺樣癌特異性相關(guān)抗原PPO抗體 0.2ml

phospho-CHEK1(Ser317)  磷酸化細(xì)胞周期檢測點激酶1抗體 0.1ml

Blood Group Lewis a  血型Lewis a抗體 0.2ml

ATF3  活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.2ml

ALDH1L1  脫氫酶1蛋白家族L1抗體 0.1ml

反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。