小鼠原代卵巢間質細胞專用培養(yǎng)基

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內濕度應保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

CK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原 0.5mgCK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原

ADK Protein Human 重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽)

SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽)

BCL6重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽) Protein

小鼠抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA 試劑盒

Rat aithrombin III (AT- III) aibody ELISA Kit 大鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒

HumanOpacity-associatedproteins,OPAsELISAKit 人不透光相關蛋白(OPAs)試劑盒 進口分裝

HumanAngiotensinconveingenzyme,ACE試劑盒人血管緊張素轉化酶(ACE)試劑盒

植物高質化線粒體分離試劑盒10次

Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1，1BACE1ELISAKit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)試劑盒

植物銅鋅超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）測試盒（比色法）

乙酰（ACH）測定試劑盒（測血清）（微板法）

總蛋白定量測定試劑盒（帶標準：BCA法）（微板法）

總蛋白（TP）測定試劑盒（帶標準：雙縮脲法）

植物油菜素甾醇(BR)ELISA 試劑盒

Human ai rubella virus IgM aibody (ai-RV IgM) ELISA Kit 人抗風疹病毒IgM抗體(ai-RV IgM)試劑盒

Porcinesolublevascuolarcelladhesionmolecules1,sVCAM-1ELISAKit 豬可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAFU(Mousealpha-L-fucosidase)ELISAKit小鼠αL巖藻糖苷酶

血液糖原化學水解比色法定量試劑盒20次

MouseThyroxineaibody,TAbELISAKit小鼠甲狀腺素抗體(TAb)試劑盒

8號染色體開放閱讀框58抗體

凋亡相關蛋白3抗體

小鼠原代卵巢間質細胞專用培養(yǎng)基SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原 0.5mgCK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原

BCL6重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽) Protein

ADK Protein Human 重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽)

FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽)