人原代子宮內(nèi)膜干細(xì)胞專用培養(yǎng)基

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測。

雄激素受體(AR)重組蛋白 Recombinant Androgen Receptor (AR)

AGT Protein Human 重組人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT 蛋白 (His 標(biāo)簽)

VCAM1重組人 VCAM-1 / CD106 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 367-606, Fc 標(biāo)簽)

IL23重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA 試劑盒

Rat ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒

HumanovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 人卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)試劑盒 進口分裝

Humanai-BullousPemphigoid180aibody,BP180-Ab試劑盒人抗BP180抗體(BP180-Ab)試劑盒

植物核糖體分離試劑盒10次

Humanα-L-iduronidase,IDUAELISAKit人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)試劑盒

質(zhì)粒大量提取試劑盒（非柱式法）   5T

QSPlasmidMaxiKit   10T

血液(溶液型）   10ml（血量）

Relax-ISOBloodDNAKitI   50ml（血量）

豬α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒

Human ai murine typhus aibody (ai-typhus-Ab) ELISA Kit 人抗斑疹傷寒抗體(ai-typhus-Ab)試劑盒

Porcineierleukin8,IL-8ELISAKit 豬白介素8(IL-8/CXCL8)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAgIa(HumanangiotensinIIreceptoypeIa)ELISAKit人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型

血液牛病毒性腹瀉病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定性試劑盒20次

MouseypsinELISAKit小鼠(ypsin)試劑盒

AF680標(biāo)記的腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體

二?；视王；D(zhuǎn)移酶2樣蛋白3抗體

人原代子宮內(nèi)膜干細(xì)胞專用培養(yǎng)基VCAM1重組人 VCAM-1 / CD106 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

雄激素受體(AR)重組蛋白 Recombinant Androgen Receptor (AR)

IL23重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AGT Protein Human 重組人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 367-606, Fc 標(biāo)簽)