細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

ECV-304+RFP細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持ECV-304+RFP細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 ECV-304+RFP 細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于ECV-304+RFP細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

M199 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                           420 ml

特級(jí)胎牛血清                             75 ml

P/S             5 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有屬

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat alkaline phosphatase (ALP) ELISA Kit 大鼠堿性0酸酶(ALP)試劑盒

HumanFreeProteinS,FP-SELISAKit 人游離蛋白S(FP-S)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRab試劑盒人乙酰受體抗體(AChRab)試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常人體腸組織S9組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)試劑盒 ，英文名： TGFβ3 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒

Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白

微粒體S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性比色法定量試劑盒20次

大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit，大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit，

兔血管生成素2試劑盒   兔血管生成素2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管生成素2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管生成素2試劑盒、兔血管生成素2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒、兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒、兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管緊張素Ⅱ試劑盒、兔血管緊張素Ⅱ 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

環(huán)指蛋白156抗體

微管蛋白δ1/δ Tubulin抗體

C5重組人 Complement C5a 蛋白 Protein

角蛋白4(KRT4)重組蛋白 Recombinant Keratin 4 (KRT4)

PLA2G2D重組人 PLA2G2D / Phospholipase A2 IID 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CSH1 Protein Human 重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血屬

ECV-304+RFP 細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基乙酰羧化酶α(ACACα)重組蛋白 Recombinant Acetyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

MCAM重組人 CD146 / MCAM 蛋白 Protein

GST Protein Schistosoma japonicum 重組日本血吸蟲(chóng) Glutathione S-transferase / GST 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein