細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

MCF-7+luc細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持MCF-7+luc細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 MCF-7+luc 細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于MCF-7+luc 細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                   445ml

特級(jí)胎牛血清                                       50 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠(T)ELISA 試劑盒

Human cyclophilin B (CyPB) ELISA Kit 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)試劑盒

HumanPodocalyxin,PCXELISAKit 人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白(PCX)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanAi-ThrombinⅢ,AT-Ⅲ試劑盒人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒

植物線(xiàn)粒體粗提分離試劑盒10次

HumaniggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1，EM-1ELISAKit人髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(EM-1)試劑盒

大鼠周期素依賴(lài)性激酶2(CDK2)試劑盒 ，英文名： CDK2 ELISA Kit

Mouse proliferating cell nuclear aigen aibody (PCNA) ELISA Kit 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)試劑盒

MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit 小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白

微型RNA(miRNA)表達(dá)載體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒10次

ELISAKitMIP-1β/CCL4大鼠巨噬細(xì)胞癥蛋白1β

小鼠甲狀旁腺激素(PTH)試劑盒   96T/48T

小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)試劑盒   96T/48T

小鼠甲基化酶(Methylase)試劑盒   96T/48T

小鼠己糖激酶(HK)試劑盒   96T/48T

肌動(dòng)蛋白抑制因子1抗體

細(xì)胞表面趨化因子受體6（CD196）抗體

CD80重組小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 蛋白 Protein

CD8a分子(CD8a)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 8a (CD8a)

ORM2重組人 ORM2 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

MMP9 Protein Rat 重組大鼠 MMP-9 / CLG4B 蛋白

MCF-7+luc 細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基肌球蛋白重鏈1(MYH1)重組蛋白 Recombinant Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult (MYH1)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白

GFRA3重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 Protein

IL13RA2 Protein Canine 重組狗 IL13RA2 / IL13R 蛋白

CCL23重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白 Protein