人原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持人原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A 0.5mgMAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微管相關(guān)蛋白1A抗原

ALOX15B Protein Human 重組人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

NT5E重組食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

WIF1 Protein Mouse 重組小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL2重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA 試劑盒

Rat alcohol dehydrogenase (ADH) ELISA Kit 大鼠乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒

Huma-lymphoopicvirusⅠ,HTLV-ⅠELISAKit 人類嗜T淋巴細(xì)胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanGlycatedAlbumin,GA試劑盒人糖化白蛋白(GA)試劑盒

組織蛋酸酶1(PP1)活性比色法定量試劑盒20次

Humanmonocyteierferongammainducingfactor,MIGFELISAKit人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子(MIGF/CXCL9)試劑盒

豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒   豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒、豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

植物D2試劑盒   植物D2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   植物D2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物D2試劑盒、植物D2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人Dickkopf1試劑盒   人Dickkopf 1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人Dickkopf 1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人Dickkopf 1試劑盒、人Dickkopf 1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人CD14分子試劑盒   人CD14分子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人CD14分子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人CD14分子試劑盒、人CD14分子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒

Human macrophage inflammatory protein 1 beta (MIP-1 beta /CCL4) ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)試劑盒

PorcineEsogen,EELISAKit 豬雌激素(E)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlphaManase(MouseAlphamannosidase)ELISAKit小鼠α甘露糖苷酶

血液0酸二酯酶4(PDE4)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量試劑盒20次

Mouseα-L-iduronidase,IDUAELISAKit小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)試劑盒

β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶抗體

磷酸化腫瘤易感候選基因3抗體

人原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基NT5E重組食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A 0.5mgMAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微管相關(guān)蛋白1A抗原

IL2重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

ALOX15B Protein Human 重組人 ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

WIF1 Protein Mouse 重組小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。