細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

RMPI 1640培養(yǎng)液是由Moor等研究成功的，最初為培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞的需要而準(zhǔn)備。開(kāi)始的配方特別適合懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞，后經(jīng)多次改良從RPMI 1630、1634，而至RMPI 1640。其組成較為簡(jiǎn)單，但可以適應(yīng)很多種類(lèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)。不僅腫瘤細(xì)胞，而且很多正常組織細(xì)胞可用RMPI 1640進(jìn)行體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室一般將RMPI 1640作為實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞維持的基本培養(yǎng)液，目前RMPI 1640是應(yīng)用較為廣泛的培養(yǎng)基之一。本培養(yǎng)基為無(wú)添加葡萄糖RMPI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human urinary protein (UP) ELISA Kit 人尿蛋白(UP)試劑盒

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMWELISAKit 人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GuineapigleukoieneD4,LT-D4試劑盒豚鼠白三烯D4(LTD4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞壁可溶性總蛋白制備試劑盒20次

MouseCA724ELISAKit小鼠標(biāo)志物(CA724)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠抑制素B(INHB)試劑盒 ，英文名： INHB ELISA Kit

Mouse immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白M(IgM)試劑盒

MouseP-SelectinELISAkit 小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanDiphtheriaaibodyELISAKit人白喉抗體

細(xì)胞Akt/PKB激酶總活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitsmActinin-α大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α

血紅蛋白檢測(cè)    (Mg) test case (machine, manual)

產(chǎn)品名稱(chēng)   Serum low-density lipoprotein (LDL) test kit

甘油三酯（TG酶法）測(cè)試盒   Serum high-density lipoprotein (HDL) test kit

總（CHO酶法）測(cè)試盒   Glucose (Glu) test case

磷酸化胰島素受體抗體

有絲分裂控制蛋白dis3抗體

CNTNAP2重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

ENPP2重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Hum屬

RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha 0.5mgCaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗原

F9 Protein Human 重組人 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白

CPB1重組小鼠 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 Protein

SLAMF1 Protein Rat 重組大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 蛋白

TP63重組人 P63 / TP63 / Tumor protein p63 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein