小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的相關(guān)：真/酵母脫氧胸苷二二葡萄糖焦化（dTDP glucose pyrophosphorylase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次
紅酵母培養(yǎng)基 100毫升
小量酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試劑盒 20次
大量（文庫(kù)）酵母細(xì)胞*轉(zhuǎn)化試劑盒 10次
酵母細(xì)胞質(zhì)粒提取試劑盒 20次
酵母斑雜交試劑盒 10次

產(chǎn)品廠地：上海市

更新時(shí)間：2025-02-28

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

訪問(wèn)量：698

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產(chǎn)品分類(lèi)

技術(shù)文章

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品牌	其他品牌	貨號(hào)	GOY-01X1171
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	產(chǎn)品僅供科研使用	應(yīng)用領(lǐng)域	化工

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	貨號(hào)
小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶	GOY-01X1171

商品介紹：

名稱(chēng) 小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞

2.組織來(lái)源：結(jié)腸組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜）。腸黏膜上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機(jī)體面對(duì)病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強(qiáng)度。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)方法，為研究腸黏膜上皮細(xì)胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細(xì)胞模型。

5.方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞采用先機(jī)械分離法、后膠原酶消化法并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M159

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

TNFA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽

PPP2CA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

IL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

小鼠 IL2RB / CD122 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

小鼠 IL2RB / CD122 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 ERBB2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

HHIP 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

HHIP 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

PRKAA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

HSPA8 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞Candida sp.嗜環(huán)蛋白;親環(huán)素A檢測(cè)試劑盒

Candida sp.嗜酸性粒趨化蛋白檢測(cè)試劑盒

Saccharomyces cerevisiae嗜酸性粒陽(yáng)離子蛋白檢測(cè)試劑盒

Saccharomyces cerevisiae受體TNFRSF結(jié)合激1檢測(cè)試劑盒

Rhodotorula minuta受體激檢測(cè)試劑盒

Pichia anomala受體相互作用蛋白1檢測(cè)試劑盒

Saccharomyces sp.瘦素檢測(cè)試劑盒

Saccharomyces sp.瘦素受體檢測(cè)試劑盒

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