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冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 TGF-beta 3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

 TROP2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

 TROP2 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

 Vitronectin 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

 PTEN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

 PTEN 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

 TNFRII 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

 IL6R 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

 IL6R 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

 IL6 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞莫匹羅星鋰鹽 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5mg/支*5支/包

0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Cadherin-6

0.156-10 ng/mL 豬皰疹病毒(PHV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

62.5-4000 pg/mL 人可溶性白介素6受體(sIL-6R/CD126)ELISA試劑盒

葡萄球菌選擇性瓊脂110 英文名稱：Staphylococcus Selective Agar 10 產(chǎn)品規(guī)格：250g

0.625-40 ng/ml 人顆粒K(GZMK)ELISA試劑盒

78-5000 pg/mL 人PMA誘導(dǎo)蛋白1(PMAIP1)ELISA試劑盒

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase

31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Autoimmune regulator

78-5000 pg/mL 人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)ELISA試劑盒