小鼠原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于小鼠原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A 0.5mgMICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 一種細(xì)胞應(yīng)激分子抗原

COX5B Protein Human 重組人 COX5B 蛋白

TGFBR2重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD3D Protein Mouse 重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CDH17重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白 Protein

大鼠配對框基因6(PAX6)試劑盒 ，英文名： PAX6 ELISA Kit

Mouse thromboxane B2 (TXB2) ELISA Kit 小鼠血栓素B2(TXB2)試劑盒

RatGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 大鼠γ氨基(GABA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGP210(MouseAi-glucoprotein210)ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體

細(xì)胞丁酰酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量試劑盒20次

RatThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠敏感蛋白-1   英文名稱：   thrombospondin 1   規(guī)格：      英文縮寫：   TSP-1

小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白   英文名稱：   thrombomodulin   規(guī)格：      英文縮寫：   TM

小鼠TH糖蛋白   英文名稱：   Mouse Tamm Horsfall Protein   規(guī)格：      英文縮寫：   THP

小鼠抗酸性0酸酶5   英文名稱：   Mouse Tarate Resista Acid Phosphatase 5   規(guī)格：      英文縮寫：   AP 5

小鼠乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 96T/48T

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)試劑盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表面活性蛋白D(SP-D)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF試劑盒豚鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量試劑盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)試劑盒規(guī)格：96T/48T

eIF3β蛋白抗體

過氧化酶1

小鼠原代角膜內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基TGFBR2重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A 0.5mgMICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 一種細(xì)胞應(yīng)激分子抗原

CDH17重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白 Protein

COX5B Protein Human 重組人 COX5B 蛋白

CD3D Protein Mouse 重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對超凈工作臺進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測。