冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：   

商品介紹：

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

狗 IL2RB / IL2 Receptor beta 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

狗 IL3RA 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 KLK1 / Kallikrein 1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 CD122 / IL2RB / IL2 Receptor beta 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 SPARCL1 / SPARC-like 1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 ANGPTL4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 PROC1 / Protein C / PROC 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 GYPA / CD235a / Glycophorin A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 RAB27B 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞Saccharomyces cerevisiae抗心肌肌球蛋白抗體檢測試劑盒

Saccharomyces cerevisiae可溶性補體受體檢測試劑盒

Candida boidinii乙型肝炎病前S1抗原檢測試劑盒

Candida boidinii清道夫受體B檢測試劑盒

Candida boidinii鞘磷脂合成2檢測試劑盒

Candida boidinii補體因子H相關(guān)蛋白3檢測試劑盒

Candida boleticola跨膜蛋白98檢測試劑盒

Debaryomyces hansenii var. hansenRas同源基因家族成員A檢測試劑盒