小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)*：細(xì)賴鐵瓊脂平板 50個(gè)
細(xì)醋酸鉛瓊脂平板 50個(gè)
葡萄球110肉湯 500毫升
腸桿EE營(yíng)養(yǎng)肉湯 500毫升
細(xì)脫氧膽酸鹽瓊脂平板 50個(gè)
低鹽LB細(xì)培養(yǎng)液 500毫升

產(chǎn)品廠地：上海市

更新時(shí)間：2025-02-17

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

訪問量：373

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產(chǎn)品分類

技術(shù)文章

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品牌	其他品牌	貨號(hào)	GOY-01X1223
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	產(chǎn)品僅供科研使用	應(yīng)用領(lǐng)域	化工

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶	GOY-01X1223

商品介紹：

名稱 小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞

2.組織來源：眼角膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至*失去透明性。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實(shí)質(zhì)層相對(duì)脫水狀態(tài)，維持透明性。

5.方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M179

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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β分泌抗體Human GRB7 ELISA Kit大鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1（TSP-1）ELISA試劑盒,

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BaxHuman GRID1 ELISA Kit雞一氧化氮（NO）ELISA試劑盒,

程序性死亡配體2抗體Human GPS2 ELISA Kit猴白介素4（IL-4）ELISA試劑盒,

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