豬胸膜肺炎放線桿菌PCR試劑盒擴增產(chǎn)物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺

1)zui常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系

3) 與反應(yīng)起始時RNA的總量及純度有關(guān)

4) 建議在試驗中加入對照RNA

5) di一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴增時，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10

6) 目的mRNA中含有強的轉(zhuǎn)錄中止位點，可以試用以下方法解決：

a. 將di一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。

b. 使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行di一鏈反應(yīng)。

7) 建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物（GSP）用于di一鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu)，如環(huán)狀結(jié)果，有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火；或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進(jìn)行有效延伸。